Getih PCR Kit langsung

Penguatan gancang tina gén target langsung ngagunakeun getih salaku témplat tanpa ékstraksi.

Alat ieu nyoko kana polimérase DNA anti-panghambat anu direkayasa sacara genétis pikeun éfisién nguatkeun gén salin salinan dina génom manusa. Sistem panyangga anu dioptimalkeun dina kit ieu ngabantosan polimérase pisan nolak hambatan sambetan PCR, sahingga sacara langsung tiasa nguatkeun DNA nganggo getih sareng sél berbudaya salaku témplat. Produk ieu gampang dijalankeun sareng henteu meryogikeun léngkah rumit sapertos pemurnian DNA atanapi conto pretreatment.
Kit ieu disayogikeun salaku 2 × MasterMix, sareng réaksina tiasa dilakukeun ku ngan saukur nambihan témplat getih sareng primér deteksi anu saluyu. Éta tiasa diterapkeun dina sél berbudaya mamalia sapertos manusa, beurit, babi, sapi sareng spésiés sanésna, ogé seger atanapi 4 ℃ cryopreserve sakabeh getih, anticoagulant (EDTA, sitrat, heparin), gumpalan getih cair sareng bintik getih garing disimpen dina kartu komérsial Whatman 903 sareng FTA Elute.

Ucing. Henteu	Ukuran Pakét
4992529	20 ×l × 100 rxn
4992530	20 ×l × 500 rxn

Kirim email ka kami

Detil Produk

Conto Ékspérimén

FAQ

Tanda Produk

Fitur

■ Basajan sareng gancang: amplifikasi PCR tiasa langsung dilakukeun nganggo getih salaku témplat, tanpa kedah léngkah-léngkah anu nyusahkeun tina persiapan sampel sareng ékstraksi DNA.
■ purity tinggi: The skip tina sampel pre-perlakuan jeung léngkah ékstraksi DNA tiasa ngabantu pikeun nyingkahan kontaminasi silang sampel.
■ throughput tinggi: Idéntifikasi PCR pikeun sampel skala ageung tiasa dilakukeun ku ngagabungkeun kit sareng pelat PCR 96/384-sumur.
■ Universalitas anu kuat: Alat ieu épisién tiasa nguatkeun fragmen atanapi fragmen GC anu luhur kalayan struktur sékundér anu rumit, sareng panjang amplifikasi tiasa dugi ka 5 kb.
■ Résistansi setrés anu kuat: iket ieu tiasa dilarapkeun pikeun sababaraha spésiés sareng sampel getih anu dilestarikan ku sababaraha cara.

Aplikasi

Produk PCR tina iket ieu ngandung "A" dina tungtung 3'-end, anu tiasa langsung dianggo pikeun kloning vektor TA. Kit ieu tiasa dianggo pikeun amplifikasi fragmen DNA génomik, analisis genetik anu lumayan tinggi sareng analisis genotip (sapertos deteksi gén).

Sadaya produk tiasa ngarobih pikeun ODM / OEM. Kanggo detil,mangga pencét Service ngaropéa (ODM / OEM)

Saméméhna: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Teras: Kit Tisu Langsung PCR Kit

	Ngagunakeun anticoagulasi EDTA manusa salaku témplat, 4 gén kalayan eusi GC anu béda dikuatkeun ku Blood Direct PCR Kit. Sistem réaksi PCR nyaéta 20 μl, sareng 1 μl getih dianggo salaku citakan. M: TIANGEN Marker II; 1: Ukuran potongan 1090 bp, eusi GC 68,1%; 2: Ukuran potongan 1915 bp, eusi GC 70,4%; 3: Ukuran pecahan 448 bp, eusi GC 74,8%; 4: Ukuran fragmen 1527 bp, eusi GC 61,5%. Hasil ékspérimén: Kit Langsung PCR Darah sacara efektif tiasa nguatkeun fragmen DNA kalayan eusi GC dina kisaran 61.5% -74.8%, nunjukkeun éta sanggup nguatkeun fragmen-GC tinggi.
	Ngagunakeun anticoagulasi EDTA manusa salaku témplat, 5 gén anu bénten panjangna (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 sareng Hn4.0) dikuatkeun ku Blood Direct PCR Kit. Sistem réaksi PCR nyaéta 20 μl, sareng 1 μl getih dianggo salaku citakan. M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 sampel getih anu béda; NTC: kontrol tanpa primér. Hasil ékspérimén: Blood Direct PCR Kit tiasa nguatkeun fragmen kalayan panjangna salami 4 kb, nunjukkeun éta sanggup nguatkeun fragmen panjang.
	Ngagunakeun anticoagulasi EDTA manusa salaku témplat, Blood Direct PCR Kit digunakeun pikeun deteksi PCR tina sampel getih anu béda. Sistem réaksi PCR nyaéta 20 μl, sareng 1 μl getih dianggo salaku citakan. M: TIANGEN Marker II; 1-9: jumlah beban getih nyaéta 0,1 μl, 0,2 μl, 0,3 μl, 0,4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl sareng 5 μl, masing-masing; NTC: kontrol kalayan henteu témplat Hasil ékspérimén: Darah Langsung PCR Kit gaduh résistansi kuat kana getih sareng tiasa nguatkeun sampel getih kalayan rentang beban 0,1-5 μl.
	Sampel getih tina manusa, beurit, hayam sareng spésiés sanés anu ngagaduhan perlakuan anu sanés dianggo salaku témplat. Blood Direct PCR Kit digunakeun pikeun nguatkeun PRNP (manusa, 750 bp), Actin (beurit, 200 bp), sareng β-Actin (Hayam, 1.0 kb). Sistem réaksi PCR nyaéta 20 μl, sareng 1 μl getih dianggo salaku citakan. M: TIANGEN Marker II. Hasil ékspérimén: Kit Langsung PCR Darah tiasa dilarapkeun dina rupa-rupa sampel, sareng deteksi PCR langsung tiasa dilakukeun dina sampel getih tina sababaraha spésiés kalayan perlakuan anu béda.

Q: Henteu aya band penguat

A-1 Citakan

■ témplatna ngandung kokotor protéin atanapi panghambat Taq, sareng sajabana ——Murni témplat DNA, ngaleungitkeun kokotor protéin atanapi nimba témplat DNA nganggo kit pemurnian.

■ Dématurasi témplat henteu lengkep ——Sapatuh naékkeun suhu dématurasi sareng manjangkeun waktos dématurasi.

■ Dégradasi témplat ——Siapkeun deui témplat.

A-2 Primer

■ Kualitas primér anu lemah ——Re-synthesize primér.

■ degradasi Primer ——Kuatkeun primér konsentrasi luhur kana volume leutik pikeun pelestarian. Hindarkeun sababaraha katirisan sareng cair atanapi jangka panjang 4 ° C cryopreserve.

■ Desain primér anu henteu leres (sapertos panjang primér henteu cekap, dimer kabentuk antara bahan dasar, sareng sajabana) -Résainer modél (hindarkeun pembentukan primer dimer sareng struktur sékundér)

A-3 Mg²⁺konsentrasi

■ Mg²⁺ konsentrasi teuing handap --—Bener ningkatkeun Mg²⁺konsentrasi: Optimalkeun Mg²⁺ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg²⁺ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

Suhu suhu A-4

■ Suhu anil anu luhur mangaruhan kana beungkeutan primér sareng témplat. —— Ngurangan suhu anilasi sareng ngaoptimalkeun kaayaan kalayan gradién 2 ° C.

A-5 waktos penyuluh

■ Waktu penyuluhan singget —— Ningkatkeun waktos panyambung.

P: Positip palsu

Fénomena: Sampel négatip ogé nunjukkeun pita urutan target.

A-1 Kontaminasi PCR

■ Kontaminasi silang tina target udagan atanapi produk amplifikasi —— Ati-ati henteu pipet sampel anu ngandung urutan udagan dina sampel négatip atanapi tumpahkeunana ti tabung centrifuge. Réagen atanapi alat-alat kedah diropea pikeun ngaleungitkeun asam nukléat anu aya, sareng ayana kontaminasi kedah ditangtoskeun ngalangkungan ékspérimén kontrol négatip.

■ Kontaminasi réagen ——Alikot réagen sareng simpen dina suhu anu handap.

A-2 Perdanar

■ Mg²⁺ konsentrasi teuing handap --—Bener ningkatkeun Mg²⁺ konsentrasi: Optimalkeun Mg²⁺ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg²⁺ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

■ Desain primér anu teu leres, sareng urutan target ngagaduhan homologi sareng urutan non-target. ——Rebulan desain ulang.

Q: amplifikasi Non-spésifik

Fénoména: Pita penguat PCR henteu saluyu sareng ukuran anu diarepkeun, boh ageung atanapi alit, atanapi kadang-kadang duanana pita penguat khusus sareng pita amplifikasi non-spésifik lumangsung.

A-1 Primer

■ Goréng kakhususan primér

——Resain desain ulang.

■ Konséntrasi primér teuing tinggi ——Benerkeun ningkatkeun suhu dématurasi sareng manjangkeun waktos dématurasi.

A-2 Mg²⁺ konsentrasi

■ Anu Mg²⁺ konsentrasi teuing tinggi ——Benerkeun ngirangan konsentrasi Mg2 +: Optimalkeun Mg²⁺ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg²⁺ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

A-3 Polimérase Terpanjang

■ Jumlah énzim anu kaleuleuwih —— Ngurangan jumlah énzim anu saluyu dina interval 0,5 U.

Suhu suhu A-4

■ Suhu anil teuing handap ——Sapatna naékkeun suhu anil atanapi adopsi metode annealing dua tahap

Siklus PCR A-5

■ Teuing siklus PCR —— Ngurangan jumlah siklus PCR.

Q: Patchy atanapi smear band

A-1 Primer-— Spésifisitas lemah ——Resain ulang primér, robih posisi sareng panjang primér pikeun ningkatkeun kakhususan na; atanapi ngalaksanakeun PCR bersarang.

DNA Citakan A-2

——Témplatna henteu murni ——Murni témplat atanapi nimba DNA nganggo kit pemurnian.

A-3 Mg²⁺ konsentrasi

——Mg²⁺ konsentrasi teuing tinggi ——Benerkeun ngirangan Mg²⁺ konsentrasi: Optimalkeun Mg²⁺ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg²⁺ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

A-4 dNTP

—— Konsentrasi dNTP seueur teuing —— Ngurangan konsentrasi dNTP kalayan pantes

A-5 Suhu Annealing

——Tuh suhu anil anu handap ——Sapatna naékkeun suhu anil

Siklus A-6

—— Kacida seueur siklusna—— Optimalkeun jumlah siklusna

P: Sakumaha seueur témplat DNA anu kedah ditambihan dina sistem réaksi PCR 50 μl?

Q: Kumaha carana nguatkeun fragmen panjang?

Léngkah munggaran nyaéta milih polimérase anu pas. Polimérase Taq rutin henteu tiasa dirobih kusabab kurangna kagiatan exonuclease 3'-5, sareng henteu cocog pisan bakal ngirangan épisiénsi perpanjangan fragmen. Ku alatan éta, Taq polimérase sacara épéktip moal tiasa nguatkeun fragmen target anu langkung ageung tibatan 5 kb. Taq polimérase kalayan modifikasi khusus atanapi polimérase kasatiaan luhur sanésna kedah dipilih pikeun ningkatkeun épisiénsi penyuluhan sareng nyumponan kabutuhan amplifikasi fragmen panjang. Salaku tambahan, amplifikasi tina fragmen panjang ogé meryogikeun pangaluyuan anu sami pikeun desain primér, waktos denaturasi, waktos perpanjangan, buffer pH, sareng sajabana Biasana, bahan primér kalayan 18-24 bp tiasa nyababkeun ngahasilkeun anu langkung saé. Dina raraga nyegah karusakan témplat, waktos dématurasi dina 94 ° C kedah dikirangan janten 30 detik atanapi kirang per siklus, sareng waktos naékkeun suhu kana 94 ° C sateuacan amplifikasi kedah kirang ti 1 mnt. Sumawona, netepkeun suhu perpanjangan sakitar 68 ° C sareng ngararancang waktos perpanjangan numutkeun tingkat 1 kb / mnt tiasa mastikeun amplifikasi anu épéktip pikeun fragmen panjang.

Q: Kumaha carana ningkatkeun kasatiaan amplifikasi PCR?

Tingkat kasalahan amplifikasi PCR tiasa dikirangan ku ngagunakeun rupa-rupa poliméras DNA kalayan kasatiaan luhur. Diantara sadaya polimérase DNA Taq anu dipendakan dugi ka ayeuna, énzim Pfu ngagaduhan tingkat kasalahan anu panghandapna sareng kasatiaan pangluhurna (tingali tabel anu dipasang). Salaku tambahan kana pilihan énzim, panaliti salajengna tiasa ngirangan tingkat mutasi PCR ku ngaoptimalkeun kaayaan réaksi, kalebet ngaoptimalkeun komposisi panyangga, konsentrasi polimérase termostér sareng ngaoptimalkeun jumlah siklus PCR.

Tulis pesen anjeun didieu teras kirimkeun ka kami