2 × Pfu PCR Campuran

Ultra-murni kasatiaan luhur Taq DNA polimérase.

Pfu DNA Polymerase dikedalkeun tina E.coli kalayan gén Pyrococus Furiosis DNA Polymerase klonase sareng dimurnikeun sareng dipisahkeun ku sababaraha purifikasi kolom. Kusabab Pfu ngagaduhan kagiatan éksékonésor 3'-5 ', éta tiasa dibaca dina prosés amplifikasi DNA, sedengkeun Taq DNA Polimérase henteu tiasa. Sanaon poliméras DNA Taq sanés sapertos Vent, Deep Vent, Tli, UITma, sareng sajabana ngagaduhan fungsi péresan, Pfu ngagaduhan tingkat henteu cocog anu paling handap diantara sadayana polimase DNA Taq anu dipendakan dugi ka ayeuna. Pfu DNA Polymerase ngagaduhan stabilitas termal anu langkung saé tibatan polimérase DNA Taq umum, sareng éta tiasa ngajaga kagiatan langkung ti 90% dina 95 ° C salami 1 jam.

Hiji-pipah Pfu PCR Campuran (Sértipikasi Produk Tinggi-Nasional Nasional)

■ Campuran Pfu PCR parantos ningkat spésifisitas sareng sensitipitas réaksi PCR sareng tiasa nguatkeun témplat rumit kalayan kontén GC anu luhur, struktur sékundér sareng sajabina. Sedeng 2 salinan témplat target tiasa diperkuat, mastikeun hasil ékspérimén anu langkung akurat.

■ Formula Pfu MasterMix anu unik ngajantenkeun sistem réaksi sadayana stabil pisan, sareng kagiatanana moal kapangaruhan ku panyimpenan beku-cair atanapi panyimpenan jangka panjang dina 4 ° C.

■ Solusi campuran PCR anu tos siap sareng épisién tiasa nyiapkeun operasi gancang sareng saderhana, ngirangan intensitas tanaga gawé sareng kasalahan sampling. Ningkatna kinerja PCR sareng pangoptimal ogé kalebet kana campuran, anu ngirangan sarat dina kaayaan PCR.

■ Produk ieu duanana ngandung sistem pewarna sareng bebas pewarna. Produk Campuran PCR campuran-pewarna tiasa langsung éléktroforés saatos PCR, tanpa nambihan conto panyangga.

Ucing. Henteu Ukuran Pakét
4992780 1 ml
4992781 5 * 1ml
4992782 1 ml
4992906 5 * 1ml

Detil Produk

Alur kerja

FAQ

Tanda Produk

Harti Kegiatan

Kegiatan 1 unit (U) Pfu DNA Polymerase dihartikeun salaku jumlah énzim anu diperyogikeun pikeun ngasupan 10 nmol deoxynucleotides kana zat anu teu leyur asam dina 74 ° C dina waktos 30 menit nganggo DNA spérma salmon diaktipkeun salaku témplat / primér.

Kontrol Kualitas

Kamurnian ku deteksi SDS-PAGE langkung ti 99%; Henteu aya kagiatan nuklir eksogen dideteksi; Gén-salinan tunggal dina génom manusa tiasa dikuatkeun sacara épéktip; Henteu aya parobahan kagiatan anu penting nalika disimpen dina suhu kamar salami saminggu.

Parameter Téknis utami

Éta ngagaduhan kagiatan exonuclease 3'-5 sareng teu aya kagiatan 5'-3 ex exonuc please. Laju ngalegaan amplifikasi DNA langkung handap tibatan Taq polimérase, sareng umumna laju panyambungan énzim Pfu nyaéta 0,5-1 kb per menit. Stabilitas termal Pfu langkung saé tibatan Taq. Pikeun témplat anu ngagaduhan eusi GC anu luhur, suhu denaturasi tiasa ningkat kana 98 ° C, anu teu aya pangaruhna kana aktivitas Pfu polimérase. Produk PCR bobo-réngsé, anu tiasa ditambihan ku overhangs 3'-dA sateuacan dihijikeun sareng vektor TA atanapi diklon kalayan vektor anu tumpul

Aplikasi

Éta tiasa dianggo pikeun amplifikasi kasatiaan luhur DNA, sapertos klon éksprési gén, mutasi anu diarahkeun ku situs, analisis polymorphism nukleotida tunggal (SNP) sareng ngabéréskeun tungtung.

Sadaya produk tiasa ngarobih pikeun ODM / OEM. Kanggo detil,mangga pencét Service ngaropéa (ODM / OEM)


  • Saméméhna:
  • Teras:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Anggo DNA génomik salaku témplat pikeun ngagedéan sempalan 1kb.
    Saatos réaksi PCR, candak 5 μl pikeun deteksi éléktroforesis.
    Q: Henteu aya band penguat

    A-1 Citakan

    ■ témplatna ngandung kokotor protéin atanapi panghambat Taq, sareng sajabana ——Murni témplat DNA, ngaleungitkeun kokotor protéin atanapi nimba témplat DNA nganggo kit pemurnian.

    ■ Dématurasi témplat henteu lengkep ——Sapatuh naékkeun suhu dématurasi sareng manjangkeun waktos dématurasi.

    ■ Dégradasi témplat ——Siapkeun deui témplat.

    A-2 Primer

    ■ Kualitas primér anu lemah ——Re-synthesize primér.

    ■ degradasi Primer ——Kuatkeun primér konsentrasi luhur kana volume leutik pikeun pelestarian. Hindarkeun sababaraha katirisan sareng cair atanapi jangka panjang 4 ° C cryopreserve.

    ■ Desain primér anu henteu leres (sapertos panjang primér henteu cekap, dimer kabentuk antara bahan dasar, sareng sajabana) -Résainer modél (hindarkeun pembentukan primer dimer sareng struktur sékundér)

    A-3 Mg2+konsentrasi

    ■ Mg2+ konsentrasi teuing handap --—Bener ningkatkeun Mg2+ konsentrasi: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    Suhu suhu A-4

    ■ Suhu anil anu luhur mangaruhan kana beungkeutan primér sareng témplat. —— Ngurangan suhu anilasi sareng ngaoptimalkeun kaayaan kalayan gradién 2 ° C.

    A-5 waktos penyuluh

    ■ Waktu penyuluhan singget —— Ningkatkeun waktos panyambung.

    P: Positip palsu

    Fénomena: Sampel négatip ogé nunjukkeun pita urutan target.

    A-1 Kontaminasi PCR

    ■ Kontaminasi silang tina target udagan atanapi produk amplifikasi —— Ati-ati henteu pipet sampel anu ngandung urutan udagan dina sampel négatip atanapi tumpahkeunana ti tabung centrifuge. Réagen atanapi alat-alat kedah diropea pikeun ngaleungitkeun asam nukléat anu aya, sareng ayana kontaminasi kedah ditangtoskeun ngalangkungan ékspérimén kontrol négatip.

    ■ Kontaminasi réagen ——Alikot réagen sareng simpen dina suhu anu handap.

    A-2 Perdanar

    ■ Mg2+ konsentrasi teuing handap --—Bener ningkatkeun Mg2+ konsentrasi: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    ■ Desain primér anu teu leres, sareng urutan target ngagaduhan homologi sareng urutan non-target. ——Rebulan desain ulang.

    Q: amplifikasi Non-spésifik

    Fénoména: Pita penguat PCR henteu saluyu sareng ukuran anu diarepkeun, boh ageung atanapi alit, atanapi kadang-kadang duanana pita penguat khusus sareng pita amplifikasi non-spésifik lumangsung.

    A-1 Primer

    ■ Goréng kakhususan primér

    ——Resain desain ulang.

    ■ Konséntrasi primér teuing tinggi ——Benerkeun ningkatkeun suhu dématurasi sareng manjangkeun waktos dématurasi.

    A-2 Mg2+ konsentrasi

    ■ Anu Mg2+ konsentrasi teuing tinggi ——Benerkeun ngirangan konsentrasi Mg2 +: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    A-3 Polimérase Terpanjang

    ■ Jumlah énzim anu kaleuleuwih —— Ngurangan jumlah énzim anu saluyu dina interval 0,5 U.

    Suhu suhu A-4

    ■ Suhu anil teuing handap ——Sapatna naékkeun suhu anil atanapi adopsi metode annealing dua tahap

    Siklus PCR A-5

    ■ Teuing siklus PCR —— Ngurangan jumlah siklus PCR.

    Q: Patchy atanapi smear band

    A-1 Primer-— Spésifisitas lemah ——Resain ulang primér, robih posisi sareng panjang primér pikeun ningkatkeun kakhususan na; atanapi ngalaksanakeun PCR bersarang.

    DNA Citakan A-2

    ——Témplatna henteu murni ——Murni témplat atanapi nimba DNA nganggo kit pemurnian.

    A-3 Mg2+ konsentrasi

    ——Mg2+ konsentrasi teuing tinggi ——Benerkeun ngirangan Mg2+ konsentrasi: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    A-4 dNTP

    —— Konsentrasi dNTP seueur teuing —— Ngurangan konsentrasi dNTP kalayan pantes

    A-5 Suhu Annealing

    ——Tuh suhu anil anu handap ——Sapatna naékkeun suhu anil

    Siklus A-6

    —— Kacida seueur siklusna—— Optimalkeun jumlah siklusna

    P: Sakumaha seueur témplat DNA anu kedah ditambihan dina sistem réaksi PCR 50 μl?
    ytry
    Q: Kumaha carana nguatkeun fragmen panjang?

    Léngkah munggaran nyaéta milih polimérase anu pas. Polimérase Taq rutin henteu tiasa dirobih kusabab kurangna kagiatan exonuclease 3'-5, sareng henteu cocog pisan bakal ngirangan épisiénsi perpanjangan fragmen. Ku alatan éta, Taq polimérase sacara épéktip moal tiasa nguatkeun fragmen target anu langkung ageung tibatan 5 kb. Taq polimérase kalayan modifikasi khusus atanapi polimérase kasatiaan luhur sanésna kedah dipilih pikeun ningkatkeun épisiénsi penyuluhan sareng nyumponan kabutuhan amplifikasi fragmen panjang. Salaku tambahan, amplifikasi tina fragmen panjang ogé meryogikeun pangaluyuan anu sami pikeun desain primér, waktos denaturasi, waktos perpanjangan, buffer pH, sareng sajabana Biasana, bahan primér kalayan 18-24 bp tiasa nyababkeun ngahasilkeun anu langkung saé. Dina raraga nyegah karusakan témplat, waktos dématurasi dina 94 ° C kedah dikirangan janten 30 detik atanapi kirang per siklus, sareng waktos naékkeun suhu kana 94 ° C sateuacan amplifikasi kedah kirang ti 1 mnt. Sumawona, netepkeun suhu perpanjangan sakitar 68 ° C sareng ngararancang waktos perpanjangan numutkeun tingkat 1 kb / mnt tiasa mastikeun amplifikasi anu épéktip pikeun fragmen panjang.

    Q: Kumaha carana ningkatkeun kasatiaan amplifikasi PCR?

    Tingkat kasalahan amplifikasi PCR tiasa dikirangan ku ngagunakeun rupa-rupa poliméras DNA kalayan kasatiaan luhur. Diantara sadaya polimérase DNA Taq anu dipendakan dugi ka ayeuna, énzim Pfu ngagaduhan tingkat kasalahan anu panghandapna sareng kasatiaan pangluhurna (tingali tabel anu dipasang). Salaku tambahan kana pilihan énzim, panaliti salajengna tiasa ngirangan tingkat mutasi PCR ku ngaoptimalkeun kaayaan réaksi, kalebet ngaoptimalkeun komposisi panyangga, konsentrasi polimérase termostér sareng ngaoptimalkeun jumlah siklus PCR.

    Tulis pesen anjeun didieu teras kirimkeun ka kami