Campuran PCR-euyeub 2 × GC

Hi-fidelity PCR MasterMix pikeun témplat kalayan eusi GC-luhur.

Produk ieu mangrupikeun 2 × MasterMix anu ngandung Taq Plus DNA polimérase, dNTPs, MgCl2, réaksi panyangga, panambah PCR, optimizer sareng stabilizer. Éta ngagaduhan kaunggulan laju amplifikasi gancang, kesederhanaan, sensitipitas tinggi, spésifisitas anu kuat, stabilitas anu saé sareng anu sami, sareng tiasa ngirangan kasalahan operasi dugi ka ageung ageung. Éta cocog pikeun réaksi PCR kalayan kasatiaan sareng amplifikasi témplat anu luhur kalayan struktur anu rumit, sapertos eusi GC anu luhur sareng struktur sékundér. Éta sacara efektif tiasa nguatkeun dugi ka 20 kb fragmen kalayan témplat saderhana sareng dugi ka 10 kb fragmen kalayan témplat anu rumit.

Ucing. Henteu Ukuran Pakét
4992794 500 μl
4992795 500 μl

Detil Produk

FAQ

Tanda Produk

Fitur

■ amplifikasi target anu saé épisiénna kalayan kontén GC anu luhur: Sistem panyangga anu dioptimalkeun sareng rumus unik anu ngabantosan pikeun ngalebur témplat kalayan kontén GC anu luhur, ngamaksimalkeun épisiénsi amplifikasi polimérase (GC%: 60% -75%).
■ Éta efektif pisan pikeun témplat rumit sareng témplat kalayan struktur sékundér.
■ Kasatiaan luhur: Polymerase kasatiaan luhur diadopsi dina PCR MasterMix pikeun mastikeun akurasi penguat.
■ Efisiensi tinggi, sistem premix super kuat sareng stabil tiasa ngaleutikan kasalahan operasi.

Sadaya produk tiasa ngarobih pikeun ODM / OEM. Kanggo detil,mangga pencét Service ngaropéa (ODM / OEM)


  • Saméméhna:
  • Teras:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Q: Henteu aya band penguat

    A-1 Citakan

    ■ témplatna ngandung kokotor protéin atanapi panghambat Taq, sareng sajabana ——Murni témplat DNA, ngaleungitkeun kokotor protéin atanapi nimba témplat DNA nganggo kit pemurnian.

    ■ Dématurasi témplat henteu lengkep ——Sapatuh naékkeun suhu dématurasi sareng manjangkeun waktos dématurasi.

    ■ Dégradasi témplat ——Siapkeun deui témplat.

    A-2 Primer

    ■ Kualitas primér anu lemah ——Re-synthesize primér.

    ■ degradasi Primer ——Kuatkeun primér konsentrasi luhur kana volume leutik pikeun pelestarian. Hindarkeun sababaraha katirisan sareng cair atanapi jangka panjang 4 ° C cryopreserve.

    ■ Desain primér anu henteu leres (sapertos panjang primér henteu cekap, dimer kabentuk antara bahan dasar, sareng sajabana) -Résainer modél (hindarkeun pembentukan primer dimer sareng struktur sékundér)

    A-3 Mg2+konsentrasi

    ■ Mg2+ konsentrasi teuing handap --—Bener ningkatkeun Mg2+ konsentrasi: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    Suhu suhu A-4

    ■ Suhu anil anu luhur mangaruhan kana beungkeutan primér sareng témplat. —— Ngurangan suhu anilasi sareng ngaoptimalkeun kaayaan kalayan gradién 2 ° C.

    A-5 waktos penyuluh

    ■ Waktu penyuluhan singget —— Ningkatkeun waktos panyambung.

    P: Positip palsu

    Fénomena: Sampel négatip ogé nunjukkeun pita urutan target.

    A-1 Kontaminasi PCR

    ■ Kontaminasi silang tina target udagan atanapi produk amplifikasi —— Ati-ati henteu pipet sampel anu ngandung urutan udagan dina sampel négatip atanapi tumpahkeunana ti tabung centrifuge. Réagen atanapi alat-alat kedah diropea pikeun ngaleungitkeun asam nukléat anu aya, sareng ayana kontaminasi kedah ditangtoskeun ngalangkungan ékspérimén kontrol négatip.

    ■ Kontaminasi réagen ——Alikot réagen sareng simpen dina suhu anu handap.

    A-2 Perdanar

    ■ Mg2+ konsentrasi teuing handap --—Bener ningkatkeun Mg2+ konsentrasi: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    ■ Desain primér anu teu leres, sareng urutan target ngagaduhan homologi sareng urutan non-target. ——Rebulan desain ulang.

    Q: amplifikasi Non-spésifik

    Fénoména: Pita penguat PCR henteu saluyu sareng ukuran anu diarepkeun, boh ageung atanapi alit, atanapi kadang-kadang duanana pita penguat khusus sareng pita amplifikasi non-spésifik lumangsung.

    A-1 Primer

    ■ Goréng kakhususan primér

    ——Resain desain ulang.

    ■ Konséntrasi primér teuing tinggi ——Benerkeun ningkatkeun suhu dématurasi sareng manjangkeun waktos dématurasi.

    A-2 Mg2+ konsentrasi

    ■ Anu Mg2+ konsentrasi teuing tinggi ——Benerkeun ngirangan konsentrasi Mg2 +: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    A-3 Polimérase Terpanjang

    ■ Jumlah énzim anu kaleuleuwih —— Ngurangan jumlah énzim anu saluyu dina interval 0,5 U.

    Suhu suhu A-4

    ■ Suhu anil teuing handap ——Sapatna naékkeun suhu anil atanapi adopsi metode annealing dua tahap

    Siklus PCR A-5

    ■ Teuing siklus PCR —— Ngurangan jumlah siklus PCR.

    Q: Patchy atanapi smear band

    A-1 Primer-— Spésifisitas lemah ——Resain ulang primér, robih posisi sareng panjang primér pikeun ningkatkeun kakhususan na; atanapi ngalaksanakeun PCR bersarang.

    DNA Citakan A-2

    ——Témplatna henteu murni ——Murni témplat atanapi nimba DNA nganggo kit pemurnian.

    A-3 Mg2+ konsentrasi

    ——Mg2+ konsentrasi teuing tinggi ——Benerkeun ngirangan Mg2+ konsentrasi: Optimalkeun Mg2+ konsentrasi ku séri réaksi ti 1 mM ka 3 mM kalayan interval 0,5 mM pikeun nangtoskeun optimal Mg2+ konsentrasi pikeun tiap témplat sareng buku dasar.

    A-4 dNTP

    —— Konsentrasi dNTP seueur teuing —— Ngurangan konsentrasi dNTP kalayan pantes

    A-5 Suhu Annealing

    ——Tuh suhu anil anu handap ——Sapatna naékkeun suhu anil

    Siklus A-6

    —— Kacida seueur siklusna—— Optimalkeun jumlah siklusna

    P: Sakumaha seueur témplat DNA anu kedah ditambihan dina sistem réaksi PCR 50 μl?
    ytry
    Q: Kumaha carana nguatkeun fragmen panjang?

    Léngkah munggaran nyaéta milih polimérase anu pas. Polimérase Taq rutin henteu tiasa dirobih kusabab kurangna kagiatan exonuclease 3'-5, sareng henteu cocog pisan bakal ngirangan épisiénsi perpanjangan fragmen. Ku alatan éta, Taq polimérase sacara épéktip moal tiasa nguatkeun fragmen target anu langkung ageung tibatan 5 kb. Taq polimérase kalayan modifikasi khusus atanapi polimérase kasatiaan luhur sanésna kedah dipilih pikeun ningkatkeun épisiénsi penyuluhan sareng nyumponan kabutuhan amplifikasi fragmen panjang. Salaku tambahan, amplifikasi tina fragmen panjang ogé meryogikeun pangaluyuan anu sami pikeun desain primér, waktos denaturasi, waktos perpanjangan, buffer pH, sareng sajabana Biasana, bahan primér kalayan 18-24 bp tiasa nyababkeun ngahasilkeun anu langkung saé. Dina raraga nyegah karusakan témplat, waktos dématurasi dina 94 ° C kedah dikirangan janten 30 detik atanapi kirang per siklus, sareng waktos naékkeun suhu kana 94 ° C sateuacan amplifikasi kedah kirang ti 1 mnt. Sumawona, netepkeun suhu perpanjangan sakitar 68 ° C sareng ngararancang waktos perpanjangan numutkeun tingkat 1 kb / mnt tiasa mastikeun amplifikasi anu épéktip pikeun fragmen panjang.

    Q: Kumaha carana ningkatkeun kasatiaan amplifikasi PCR?

    Tingkat kasalahan amplifikasi PCR tiasa dikirangan ku ngagunakeun rupa-rupa poliméras DNA kalayan kasatiaan luhur. Diantara sadaya polimérase DNA Taq anu dipendakan dugi ka ayeuna, énzim Pfu ngagaduhan tingkat kasalahan anu panghandapna sareng kasatiaan pangluhurna (tingali tabel anu dipasang). Salaku tambahan kana pilihan énzim, panaliti salajengna tiasa ngirangan tingkat mutasi PCR ku ngaoptimalkeun kaayaan réaksi, kalebet ngaoptimalkeun komposisi panyangga, konsentrasi polimérase termostér sareng ngaoptimalkeun jumlah siklus PCR.

    Tulis pesen anjeun didieu teras kirimkeun ka kami